catalase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400353-ACT

O gene humano CAT codifica a catalase, uma enzima heme peroxissomal que decompõe o peróxido de hidrogénio em água e oxigénio, limitando o dano oxidativo a proteínas, lípidos e ao ADN. Ao controlar o fluxo de H2O2, a catalase ajuda a definir o “tom” redox que influencia redes de sinalização sensíveis a ROS, a comunicação entre peroxissomas e mitocôndrias e as respostas celulares ao stress metabólico e inflamatório. Alterações na atividade da catalase têm sido associadas a fenótipos de stress oxidativo relevantes para disfunção cardiometabólica, neurodegeneração e biologia tumoral, em que o desequilíbrio redox pode remodelar a proliferação, a sobrevivência e a estabilidade genómica. Assim, CAT é amplamente utilizado como um nó mecanístico para estudar as defesas antioxidantes, a homeostase peroxissomal e programas transcricionais adaptativos ao stress.

catalase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

catalase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de catalase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de catalase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via catalase em células tumorais com expressão de CAT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.