Plásmido CRISPR de Activación (h) catalase: sc-400353-ACT

El gen humano **CAT** codifica la catalasa, una enzima hemo peroxisomal que descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, limitando el daño oxidativo a proteínas, lípidos y ADN. Al controlar el flujo de H2O2, la catalasa ayuda a establecer el tono redox que influye en redes de señalización sensibles a las ERO, en la comunicación funcional peroxisoma–mitocondria y en las respuestas celulares al estrés metabólico e inflamatorio. La alteración de la actividad de la catalasa se ha asociado con fenotipos de estrés oxidativo relevantes para la disfunción cardiometabólica, la neurodegeneración y la biología tumoral, donde el desequilibrio redox puede remodelar la proliferación, la supervivencia y la estabilidad genómica. Por ello, **CAT** se utiliza ampliamente como un nodo mecanístico para estudiar las defensas antioxidantes, la homeostasis peroxisomal y los programas transcripcionales adaptativos al estrés.

catalase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

catalase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de catalase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de catalase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía catalase en células tumorales con expresión de CAT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.