Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
caspase-14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402687
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- caspase-14 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico caspase-14, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: caspase-14 Antibody (D-10): sc-48336
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
caspase-14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402687 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CASP14 codifica la caspasi-14, un membro atipico della famiglia delle caspasi che svolge un ruolo principalmente nella differenziazione epidermica piuttosto che nell’apoptosi. È altamente espressa nei cheratinociti e contribuisce alla cornificazione e alla formazione della barriera cutanea sostenendo i programmi di differenziazione terminale e gli eventi di processamento proteolitico nello strato corneo. Attraverso queste funzioni, la caspasi-14 aiuta a regolare l’idratazione e l’integrità della barriera, collegando l’attività di CASP14 alle vie che controllano la cheratinizzazione e l’omeostasi epidermica. Un’alterazione dell’espressione o del processamento di CASP14 è stata associata a disfunzione di barriera e a fenotipi cutanei infiammatori, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie dermatologiche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CASP14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CASP14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CASP14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caspase-14.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CASP14 per lo studio della segnalazione di caspase-14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CASP14 critici per la funzione di caspase-14
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CASP14 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal caspase-14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal caspase-14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CASP14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal caspase-14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR caspase-14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CASP14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CASP14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.