Plasmide Double Nickase (h) casein kinase Iε: sc-402163-NIC

CSNK1E code la caséine kinase Iε (CK1ε) humaine, une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle divers substrats afin de coordonner le timing circadien, le trafic des récepteurs et la transduction du signal. CK1ε est un modulateur clé de la signalisation Wnt/β-caténine via la phosphorylation de Dishevelled et d’autres composants de la voie, et elle contribue également aux réponses aux dommages de l’ADN et au contrôle du cycle cellulaire par un renouvellement des protéines dépendant de la phosphorylation. Par ces fonctions, CSNK1E influence des programmes transcriptionnels, la stabilité des protéines et la dynamique du cytosquelette qui façonnent la prolifération et la différenciation. Une activité de CK1ε dérégulée a été associée dans la littérature à des phénotypes circadiens altérés et à des déséquilibres de signalisation observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment une reprogrammation de voies liée au cancer.

casein kinase Iε Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSNK1E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSNK1E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSNK1E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSNK1E.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.