CAR1/2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419458

Descripción general

Nr1i3 codifica el receptor nuclear androstano constitutivo (CAR1/2), un factor de transcripción regulado por ligandos que actúa como un sensor central de xenobióticos y endobióticos en el hígado y el intestino de ratón. Tras su activación, CAR forma heterodímeros con RXR y se une a elementos de respuesta para regular enzimas y transportadores de metabolización de Fase I/II, incluidas vías del citocromo P450, la glucuronidación y el manejo de ácidos biliares. La señalización de CAR se entrecruza con respuestas al estrés oxidativo, el metabolismo de lípidos y glucosa y programas de proliferación de hepatocitos, dando forma a respuestas adaptativas frente a fármacos y sustancias químicas ambientales. La actividad desregulada de Nr1i3 se ha vinculado con alteraciones en la disposición de fármacos, mayor susceptibilidad a lesión colestásica y fenotipos metabólicos relevantes para la toxicología y modelos de enfermedad hepática.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CAR1/2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nr1i3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nr1i3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nr1i3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CAR1/2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nr1i3 para la investigación de la señalización de CAR1/2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nr1i3 críticos para la función de CAR1/2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nr1i3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CAR1/2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CAR1/2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nr1i3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CAR1/2 (m) y el plásmido HDR CAR1/2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nr1i3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nr1i3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.