CAR1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419458

Visão geral

Nr1i3 codifica o receptor nuclear conhecido como receptor androstano constitutivo (CAR1/2), um fator de transcrição regulado por ligante que atua como sensor central de xenobióticos e endobióticos no fígado e no intestino de camundongos. Quando ativado, o CAR forma heterodímeros com o RXR e se liga a elementos de resposta para regular enzimas e transportadores de metabolização de Fase I/II, incluindo vias do citocromo P450, glucuronidação e processamento de ácidos biliares. A sinalização do CAR se cruza com respostas ao estresse oxidativo, com o metabolismo de lipídios e glicose e com programas de proliferação de hepatócitos, moldando respostas adaptativas a fármacos e a substâncias químicas ambientais. A atividade desregulada de Nr1i3 tem sido associada a alterações na disposição de fármacos, maior suscetibilidade a lesão colestática e fenótipos metabólicos relevantes para a toxicologia e para modelos de doença hepática.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CAR1/2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nr1i3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nr1i3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nr1i3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CAR1/2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nr1i3 para a investigação da sinalização de CAR1/2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nr1i3 críticos para a função CAR1/2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nr1i3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CAR1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CAR1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nr1i3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CAR1/2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CAR1/2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nr1i3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nr1i3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.