Calpain reg Plasmide Double Nickase (h): sc-403478-NIC

CAPNS1 codifica la piccola subunità regolatoria necessaria per la stabilità e l’attività dei complessi di proteasi cisteiniche ubiquitari calpaina-1 e calpaina-2. La segnalazione mediata dalle calpaine promuove una proteolisi limitata di proteine del citoscheletro e della segnalazione, modulando il turnover delle adesioni focali, la dinamica di membrana e il rimodellamento calcio-dipendente durante la migrazione cellulare, la progressione del ciclo cellulare e l’apoptosi. Attraverso il clivaggio di substrati coinvolti nelle vie di NF-κB, MAPK e nei percorsi associati alle integrine, CAPNS1 può influenzare la segnalazione infiammatoria e le risposte allo stress. Un’attività delle calpaine deregolata è stata collegata all’invasività delle cellule tumorali, alla neurodegenerazione e alla fisiopatologia cardiovascolare e metabolica, rendendo CAPNS1 un nodo utile per studi meccanicistici sulla proteostasi e sulle reti di segnalazione guidate dal calcio.

Calpain reg Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAPNS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAPNS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAPNS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAPNS1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.