Calpain 6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407700-ACT

ヒトCAPN6は、プロテアーゼ活性が限定的、または欠如している非典型的なカルパインファミリー分子であるカルパイン6をコードしており、主として細胞骨格構築の調節因子として機能します。カルパイン6は、微小管の安定化、細胞形態の制御、ならびに細胞運動性や接着の調節に関与しており、これらは分化や組織リモデリングを司る経路と交差する過程です。CAPN6の発現は、細胞骨格ダイナミクスの変化が増殖・遊走表現型に影響する発生プログラムや細胞ストレス応答の文脈で、しばしば研究されています。CAPN6の発現異常は複数の疾患関連トランスクリプトームシグネチャーで報告されており、細胞骨格依存的なリモデリングや異常増殖状態を検討するための機序的ハブとしての有用性が示唆されています。

Calpain 6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAPN6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calpain 6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAPN6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAPN6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calpain 6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAPN6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalpain 6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAPN6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalpain 6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。