Calpain 6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407700-ACT

Il gene umano **CAPN6** codifica la calpaina 6, un membro atipico della famiglia delle calpaine con attività proteasica limitata o assente, che funziona principalmente come regolatore dell’organizzazione del citoscheletro. La calpaina 6 è associata alla stabilizzazione dei microtubuli, al controllo della forma cellulare e alla modulazione della motilità e dell’adesione cellulare, processi che si intrecciano con vie di segnalazione che governano la differenziazione e il rimodellamento tissutale. L’espressione di **CAPN6** è spesso studiata nel contesto dei programmi di sviluppo e delle risposte cellulari allo stress, in cui i cambiamenti nella dinamica del citoscheletro influenzano fenotipi proliferativi e migratori. Un’alterata regolazione di **CAPN6** è stata riportata in molteplici firme trascrittomiche associate a malattie, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per indagare il rimodellamento dipendente dal citoscheletro e stati di crescita aberranti.

Calpain 6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAPN6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Calpain 6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAPN6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAPN6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Calpain 6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAPN6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Calpain 6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Calpain 6 nelle cellule tumorali con espressione di CAPN6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.