Calnexin Double Nickaseプラスミド (m): sc-419436-NIC

マウスの Canx はカルネキシンをコードしており、カルネキシンは小胞体（ER）に局在するレクチン型シャペロンで、単一グルコースが付加された N 結合型糖鎖（モノグルコシル化 N 型糖鎖）に結合することで、新生糖タンパク質の折りたたみと品質管理を促進します。カルネキシンは、ERp57 や関連する酸化還元酵素と協調しながらカルネキシン／カルレティキュリン・サイクルの中で機能し、糖タンパク質の成熟を小胞体関連分解（ERAD）および unfolded protein response（UPR）と結び付けています。膜タンパク質や分泌タンパク質の輸送および安定性を制御することで、カルネキシンはプロテオスタシス、酸化ストレスへの対処、ならびに免疫関連受容体の生合成に影響を与えます。カルネキシン依存的な品質管理の破綻は、実験モデルにおいて ER ストレス表現型やシグナル出力の変化と関連付けられており、神経変性、代謝機能障害、炎症経路に関わる変化が示されています。

Calnexin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Canx 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Canx内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Canxの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Canxが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。