Calbindin D28K Double Nickaseプラスミド (h): sc-400718-NIC

CALB1は、細胞質に存在する高親和性のCa2+結合タンパク質であるカルビンディンD28Kをコードしており、細胞内カルシウムを緩衝してCa2+トランジェントの振幅や時間経過（キネティクス）を形作ります。カルシウム依存性シグナル伝達を調節することで、神経細胞の興奮性、シナプス統合、活動依存的な転写プログラムに影響し、Ca2+介在性ストレスに対する細胞の抵抗性にも寄与します。カルビンディンD28Kは特定の神経細胞集団の分子マーカーとして広く用いられており、カルシウム恒常性、ミトコンドリア機能、酸化ストレス応答に関連するプロセスにも関与します。CALB1の発現パターンの変化は神経学・神経精神医学領域の研究で報告されており、回路機能やカルシウム調節異常の機序解明に向けた研究において、その重要性が示されています。

Calbindin D28K ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CALB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CALB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CALB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CALB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。