cadherin-16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401598-ACT

CDH16 codifica a caderina-16, uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio, enriquecida em tecidos epiteliais, particularmente nos compartimentos tubulares renais, onde sustenta a arquitetura tecidual e a polaridade epitelial. Por meio da organização das junções de adesão (adherens junctions) e da coordenação com a remodelação do citoesqueleto, a caderina-16 contribui para a sinalização dependente de contato e para a manutenção de estados epiteliais diferenciados. Alterações na expressão de CDH16 têm sido associadas à perda da integridade epitelial e vêm sendo investigadas em contextos de desenvolvimento do rim, fisiologia renal e biologia de neoplasias epiteliais. Como marcador de adesão associado à linhagem, a caderina-16 é frequentemente utilizada para estudar identidade epitelial, estabilidade juncional e programas de diferenciação de células renais.

cadherin-16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-16 em células tumorais com expressão de CDH16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.