Cacna2d1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402833-NIC

CACNA2D1 codifica la subunità accessoria α2δ-1 dei canali del calcio voltaggio-dipendenti, un regolatore chiave del traffico dei canali, della stabilità di membrana e del gating, che modella l’ingresso di calcio durante l’eccitabilità e l’accoppiamento stimolo–secrezione. Modulando la funzione dei canali CaV, Cacna2d1 influenza cascate di segnalazione calcio-dipendenti che incidono sul rilascio di neurotrasmettitori, sulla contrazione muscolare e sull’espressione genica dipendente dall’attività. Alterazioni dell’espressione di CACNA2D1 o della regolazione del complesso del canale sono state associate a un’elettrofisiologia disregolata e a processi di rimodellamento rilevanti in ambiti di ricerca neurologica e cardiovascolare. In quanto componente del complesso del canale esposta sulla superficie cellulare, Cacna2d1 è anche utile per analizzare come le interazioni extracellulari e le modifiche post-traduzionali modulino la disponibilità dei canali del calcio.

Cacna2d1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CACNA2D1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CACNA2D1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CACNA2D1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CACNA2D1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.