C8A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406590

Übersicht

C8A kodiert die Alpha-Kette der Komplementkomponente 8, eine zentrale Untereinheit des terminalen Komplementkomplexes (C5b-9), der die Bildung des Membranangriffskomplexes (MAC) und die Lyse von Zielzellen antreibt. Als Teil des angeborenen Immunsystems wirkt C8A in der Komplementkaskade nach Aktivierung des klassischen, des Lektin- und des alternativen Weges mit und beeinflusst dabei Opsonisierung, inflammatorische Signalübertragung und die Clearance von Immunkomplexen. Störungen terminaler Komplementkomponenten werden mit einer fehlregulierten Wirtsabwehr und einer veränderten Infektanfälligkeit in Verbindung gebracht; zudem ist Komplementaktivität an entzündlichen und autoimmunassoziierten Gewebeschäden beteiligt. C8A ist daher relevant für Studien zur komplementvermittelten Zytotoxizität, zur Serum-bakteriziden Aktivität und zu Mechanismen, die die Immunhomöostase steuern.

Das C8A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C8A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C8A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C8A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C8A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C8A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C8A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C8A-Exone abzielen, die für die C8A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C8A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C8A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C8A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C8A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C8A HDR-Plasmid (h) und C8A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C8A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C8A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.