C8A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406590

Visão geral

C8A codifica a cadeia alfa do componente 8 do complemento, uma subunidade central do complexo terminal do complemento (C5b-9), que impulsiona a formação do complexo de ataque à membrana (MAC) e a lise de células-alvo. Como parte do sistema imunitário inato, a C8A participa na cascata do complemento a jusante da ativação das vias clássica, das lectinas e alternativa, influenciando a opsonização, a sinalização inflamatória e a depuração de complexos imunes. A perturbação dos componentes terminais do complemento está associada a uma defesa do hospedeiro desregulada e a uma suscetibilidade alterada a infeções, e a atividade do complemento também está implicada em lesão tecidular associada a inflamação e autoimunidade. Assim, a C8A é relevante para estudos de citotoxicidade mediada pelo complemento, atividade bactericida do soro e mecanismos que controlam a homeostase imunitária.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C8A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene C8A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do C8A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do C8A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C8A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de C8A para a investigação da sinalização de C8A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) C8A críticos para a função C8A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos C8A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C8A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo C8A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus C8A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C8A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR C8A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia C8A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo C8A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.