C6orf141 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418416-ACT

C6orf141 (humano) codifica uma proteína pouco caracterizada, com anotação funcional limitada, e as evidências atuais sugerem que ela pode contribuir para programas regulatórios específicos de tipo celular, em vez de integrar uma via metabólica central. Conjuntos de dados transcriptômicos indicam expressão variável entre tecidos e contextos de desenvolvimento, o que sustenta a investigação de possíveis papéis no controle transcricional, na diferenciação celular ou em processos adaptativos ao estresse. Como os dados mecanísticos ainda são escassos, C6orf141 é frequentemente estudado como uma ORF (open reading frame) não caracterizada, para mapear redes de interação proteica, localização subcelular e assinaturas gênicas a jusante. Padrões de expressão alterados observados em estudos ômicos de algumas doenças motivam pesquisas sobre potenciais associações com estados de expressão gênica desregulada, evitando, contudo, pressupostos de causalidade.

C6orf141 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C6orf141 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C6orf141 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C6orf141 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C6orf141, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C6orf141. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C6orf141 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C6orf141 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C6orf141 em células tumorais com expressão de C6orf141 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.