C6orf141 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418416-ACT

C6orf141（ヒト）は、機能アノテーションが限られた、十分に特徴づけられていないタンパク質をコードしており、現時点の証拠からは、中核的な代謝経路というよりも、細胞種特異的な制御プログラムに関与している可能性が示唆されています。トランスクリプトームデータセットでは、組織や発生段階などの文脈に応じて発現が変動することが示されており、転写制御、細胞分化、あるいはストレス適応過程における役割の検討が支持されます。作用機序に関するデータは依然として乏しいため、C6orf141は、タンパク質相互作用ネットワーク、細胞内局在、下流の遺伝子シグネチャーを明らかにする目的で、未解明のオープンリーディングフレームとして研究されることが多い遺伝子です。いくつかの疾患オミクス研究で観察される発現変化は、因果関係を前提とせずに、遺伝子発現の破綻した状態との関連の可能性を探る研究を促しています。

C6orf141 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C6orf141の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C6orf141 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C6orf141 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC6orf141転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C6orf141の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC6orf141遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC6orf141依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC6orf141発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC6orf141経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。