C5L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410578

概要

C5AR2は、アナフィラトキシンであるC5aおよびC5a des-Argに結合する非典型的な補体受容体C5L2をコードしており、補体によって駆動される白血球シグナル伝達や炎症のトーンを形成します。典型的なC5aR1とは異なり、C5L2はしばしばGタンパク質と共役しない受容体として説明され、β-アレスチンに関連したシグナル伝達、受容体間クロストーク、ならびに骨髄系細胞や組織常在細胞におけるMAPK/NF-κB関連の下流応答を調節し得ます。補体および自然免疫経路における役割を通じて、C5AR2は走化性、サイトカイン産生、そして心代謝性炎症や組織障害応答と交差する炎症終息プログラムに影響します。C5AR2の活性や発現の変化は、敗血症様の全身性炎症、動脈硬化、代謝性疾患といった文脈で研究されており、炎症性疾患モデルにおける機序的な結節点としての有用性が示唆されています。

C5L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるC5AR2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C5AR2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C5AR2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C5L2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C5L2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C5AR2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C5L2の機能に不可欠なC5AR2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C5AR2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C5L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびC5L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、C5AR2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C5L2 HDRプラスミド（h）および C5L2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC5AR2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC5AR2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。