C4a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402428

概要

補体成分4A（C4A）は、補体C4がプロテオリティックな活性化を受ける際に生成されるC4aフラグメントをコードしており、これは古典経路およびレクチン経路における補体活性化の中核的な段階です。C4の切断はC3コンバーチャーゼの形成を助け、その下流でオプソニン化、炎症シグナル伝達、免疫複合体の除去を促進します。C4Aのコピー数や発現量の変動は、免疫調節の破綻や補体活性の変化と関連づけられており、自己免疫や神経炎症に関連する表現型との関係が示唆されています。補体活性化の指標（リードアウト）として、C4aは自然免疫と獲得免疫のクロストークや組織障害の機序を研究する際に一般的に用いられます。

C4a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるC4A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C4A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C4Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C4aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C4aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C4A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C4aの機能に不可欠なC4Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C4Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C4a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびC4a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、C4A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C4a HDRプラスミド（h）および C4a HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC4Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC4A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。