C1q-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402156-ACT

O C1QA codifica a cadeia A do componente do complemento C1q, uma molécula de reconhecimento que inicia a via clássica do complemento ao se ligar a complexos imunes e a superfícies próprias alteradas. O C1q participa da opsonização, da depuração de células apoptóticas e da modulação da sinalização imune inata, e é fortemente expresso por macrófagos e micróglia, onde molda programas inflamatórios. Por meio da ativação da cascata do complemento e da comunicação cruzada com vias fagocíticas e de citocinas, o C1q influencia a poda sináptica, a remodelação tecidual e a homeostase imunológica. A atividade desregulada de C1QA/C1q tem sido associada a fenótipos autoimunes, neuroinflamação e patologia mediada pelo complemento, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos em imunologia e neurociência.

C1q-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1QA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1q-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1QA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1QA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1q-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1QA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1q-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1q-A em células tumorais com expressão de C1QA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.