C17orf59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412334

概要

BORCS6（C17orf59）は、リソソームの微小管に沿った配置と順行性輸送を制御し、オルガネラ分布や末梢リソソーム依存的なプロセスを形作るBORC（BLOC-1関連複合体）の中核構成因子です。BORC依存的にArl8およびキネシンモーターと結合することで、C17orf59はエンドリソソーム輸送のダイナミクスに寄与し、オートファジー‐リソソーム機能、栄養シグナル伝達、膜リモデリングに影響を与えます。BORC活性の攪乱は、リソソームの分散やカーゴの取り扱いを乱し得るため、この経路は細胞ストレス応答や、神経生物学および免疫細胞機能に関連する表現型とも結び付けられています。オルガネラ輸送に関わるヒト遺伝子として、BORCS6は細胞内輸送、リソソーム駆動型代謝、ならびに複雑な疾患機構に関連するトラフィッキング異常の文脈で頻繁に研究されています。

C17orf59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBORCS6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BORCS6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BORCS6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C17orf59タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C17orf59シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BORCS6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C17orf59の機能に不可欠なBORCS6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BORCS6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C17orf59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびC17orf59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BORCS6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C17orf59 HDRプラスミド（h）および C17orf59 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBORCS6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBORCS6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。