Plasmide CRISPR/Cas9 KO C12orf34 (h): sc-408987

Présentation

FAM222A code la protéine humaine C12orf34, un facteur encore peu caractérisé dont les liens avec l’homéostasie cellulaire et la signalisation sensible au stress commencent à émerger. Les jeux de données transcriptomiques et protéomiques disponibles suggèrent une expression dépendante du contexte et une implication potentielle dans le trafic intracellulaire et les réseaux de protéostasie, en interface avec des voies liées à l’inflammation. Des altérations de l’expression de FAM222A/C12orf34 ont été rapportées dans des profils moléculaires associés à des maladies, notamment dans des jeux de données sur la neurodégénérescence et le cancer, ce qui justifie de poursuivre l’étude de ses rôles régulateurs. Des modèles de perte de fonction sont utiles pour préciser comment C12orf34 contribue aux interactions entre voies affectant la survie cellulaire, l’équilibre des signaux et des phénotypes spécifiques aux tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C12orf34 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FAM222A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FAM222A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FAM222A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C12orf34.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FAM222A pour l'étude de la signalisation de C12orf34, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FAM222A essentiels à la fonction de C12orf34
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FAM222A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C12orf34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C12orf34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FAM222A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C12orf34 plasmide HDR (h) et le C12orf34 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FAM222A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FAM222A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.