C-Nap1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421134

Visão geral

Cep250 codifica a C-Nap1, uma proteína centrossomal do tipo coiled-coil, concentrada nas extremidades proximais dos centríolos, onde contribui para a coesão do centrossoma e para a organização do material pericentriolar. A C-Nap1 atua na dinâmica do centrossoma regulada pelo ciclo celular, coordenando-se com a sinalização por quinases e proteínas de andaime para sustentar a montagem do fuso bipolar, a segregação cromossômica precisa e a manutenção da arquitetura dos microtúbulos. A perturbação da coesão do centrossoma e da integridade do fuso está intimamente ligada à instabilidade genômica, à divisão celular alterada e a fenótipos de desenvolvimento ou neurodegenerativos em sistemas modelo. Em estudos com células e tecidos de camundongo, Cep250 é, portanto, um alvo útil para investigar vias associadas ao centrossoma que influenciam proliferação, diferenciação e homeostase tecidual.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C-Nap1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cep250 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cep250, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cep250 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C-Nap1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cep250 para a investigação da sinalização de C-Nap1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cep250 críticos para a função C-Nap1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cep250 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C-Nap1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo C-Nap1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cep250. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C-Nap1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR C-Nap1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cep250 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cep250 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.