c-Jun Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421207-ACT

Jun codifica il fattore di trascrizione c-Jun, un componente centrale del complesso AP-1 che integra gli input di segnalazione MAPK per controllare l’espressione genica in risposta agli stimoli. c-Jun regola programmi coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, nell’apoptosi, nella differenziazione e nelle risposte infiammatorie attraverso il legame cooperativo con proteine della famiglia FOS sui siti AP-1. Nei sistemi murini, l’attività di JUN/AP-1 è ampiamente utilizzata come readout della segnalazione da stress e citochine, collegando vie a monte come JNK, ERK e p38 al rimodellamento trascrizionale a valle. Una segnalazione di c-Jun deregolata è implicata nella trasformazione oncogena, nel rimodellamento tissutale e nella patologia mediata dal sistema immunitario, rendendo Jun un nodo comune per studi meccanicistici dell’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione.

c-Jun Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Jun senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Jun Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Jun nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Jun, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Jun. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Jun nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Jun nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Jun nelle cellule tumorali con espressione di Jun silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.