C/EBP beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400125-ACT

CEBPB codifica o fator de transcrição C/EBP beta, uma proteína do tipo “zíper de leucina” básico que regula programas gênicos responsivos a estímulos, controlando inflamação, sinalização imune inata, progressão do ciclo celular e diferenciação celular. O C/EBP beta integra sinais de vias de citocinas e de estresse, incluindo as vias NF-κB, JAK/STAT e MAPK, para modular os resultados transcricionais que moldam a ativação de macrófagos, a adipogênese e a plasticidade de células epiteliais. Alterações na atividade de CEBPB têm sido associadas a estados inflamatórios desregulados e a processos de remodelamento, sendo frequentemente estudadas em contextos como disfunção metabólica, fibrose e redes transcricionais oncogênicas. Essas propriedades tornam o C/EBP beta um nó central para investigar como sinais extracelulares são convertidos em programas de expressão gênica específicos de linhagem e de contexto.

C/EBP beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEBPB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C/EBP beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEBPB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEBPB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C/EBP beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEBPB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C/EBP beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C/EBP beta em células tumorais com expressão de CEBPB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.