C/EBP α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419621

Panoramica

Cebpa codifica il fattore di trascrizione C/EBPα, un regolatore bZIP (basic leucine zipper) che coordina l’impegno di linea e la differenziazione terminale in molteplici tessuti, con ruoli di rilievo nello sviluppo mieloide e degli adipociti. Nelle cellule ematopoietiche, C/EBPα integra input di segnalazione per controllare l’uscita dal ciclo cellulare e i programmi di maturazione, modulando reti trascrizionali che governano proliferazione e differenziazione. Interagisce con vie coinvolte nella regolazione metabolica, nell’espressione di geni infiammatori e nel rimodellamento della cromatina, influenzando l’identità cellulare e le risposte allo stress. Un’attività deregolata di C/EBPα è spesso studiata, nei modelli murini, nel contesto di differenziazione compromessa, omeostasi immunitaria alterata e meccanismi delle patologie ematologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cebpa in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cebpa insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cebpa a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C/EBP α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cebpa per lo studio della segnalazione di C/EBP α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cebpa critici per la funzione di C/EBP α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cebpa per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C/EBP α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C/EBP α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cebpa. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C/EBP α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C/EBP α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cebpa per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cebpa definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.