BTLA CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431543-ACT

Btla は、CD28ファミリーに属する抑制性免疫受容体である B and T lymphocyte attenuator（BTLA）をコードしており、リンパ球の活性化を抑制し、末梢免疫寛容の維持に寄与します。BTLAシグナルは HVEM（TNFRSF14）との結合によって開始され、ITIM/ITSMモチーフを介してホスファターゼをリクルートし、抗原受容体近傍のシグナル伝達を減弱させます。その結果、サイトカイン産生、増殖、エフェクター分化が制限されます。マウス免疫細胞では、BTLAはT細胞の疲弊様プログラム、胚中心反応の調節、ならびにリンパ組織内の炎症性シグナルの制御に関与します。BTLA経路の破綻は、免疫チェックポイント生物学の文脈において、自己免疫、慢性炎症、感染に伴う免疫リモデリング、腫瘍免疫などの研究に広く関連します。

BTLA CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Btlaの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BTLA CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Btla 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBtla転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BTLAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBtla遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBTLA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBtla発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBTLA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。