BTLA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417186-ACT

BおよびTリンパ球関連分子（BTLA）は、CD28スーパーファミリーに属する免疫調節受容体で、複数のリンパ球サブセットに発現し、抗原受容体シグナル伝達を抑制して末梢免疫寛容を維持する阻害性チェックポイントとして機能します。リガンドであるHVEM（TNFRSF14）と結合すると、BTLAは細胞質内のITIM/ITSMモチーフを介してホスファターゼをリクルートし、近位のキナーゼカスケードを減衰させることで、T細胞の活性化、サイトカイン産生、免疫恒常性を調整します。この経路は、炎症や慢性的な抗原曝露下で適応免疫応答を微調整する、より広範な共抑制ネットワークとも交差しています。BTLAの発現またはシグナル伝達の変化は免疫調節異常と関連することが示されており、自己免疫、感染、腫瘍免疫学の文脈で研究されています。

BTLA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BTLAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BTLA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BTLA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBTLA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BTLAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBTLA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBTLA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBTLA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBTLA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。