Plasmide Double Nickase (m) BTEB1: sc-421299-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) BTEB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BTEB1 Double Nickase (m) et le plasmide BTEB1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Klf9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BTEB1 Antibody (A-5): sc-376422
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) BTEB1 | sc-421299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) BTEB1 | sc-421299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Klf9 code pour BTEB1 (Kruppel-like factor 9), un facteur de transcription à doigts de zinc C2H2 qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes d’expression génique dépendants du contexte. Dans les cellules de souris, BTEB1 intègre des signaux issus des voies des hormones nucléaires et des voies sensibles au stress pour moduler la différenciation, le contrôle du cycle cellulaire et l’homéostasie métabolique, souvent via des interactions avec les réseaux transcriptionnels Sp/KLF et des régulateurs de la chromatine. L’activité de Klf9 a été associée à la maturation neuronale, à la transcription dépendante des signaux endocriniens et aux processus de remodelage tissulaire, ce qui la rend pertinente pour des études de biologie du développement et de reprogrammation transcriptionnelle dépendante des stimuli. Une expression dérégulée de Klf9/BTEB1 a été associée à des états de prolifération et de différenciation altérés dans des modèles pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud pour l’étude mécanistique des voies de signalisation.
BTEB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Klf9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Klf9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Klf9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Klf9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.