BTEB1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421299-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BTEB1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BTEB1ダブルニカースプラスミド（m）およびBTEB1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Klf9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BTEB1 抗体 (A-5): sc-376422
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BTEB1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTEB1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Klf9はBTEB1（Kruppel-like factor 9）をコードしており、GCリッチなプロモーター要素に結合して、状況依存的な遺伝子発現プログラムを制御するC2H2型ジンクフィンガー転写因子です。マウス細胞では、BTEB1が核内ホルモン経路やストレス応答性経路からのシグナルを統合し、分化、細胞周期制御、代謝恒常性を調節します。これはしばしば、Sp/KLF転写ネットワークやクロマチン制御因子との相互作用を介して行われます。Klf9の活性は、神経成熟、内分泌応答性の転写、組織リモデリング過程と関連づけられており、発生生物学や刺激依存的な転写プログラムの再配線を扱う研究において重要です。Klf9/BTEB1の発現異常は、疾患関連モデルにおける増殖や分化状態の変化と関連していることが報告されており、機構解明のための経路解析における結節点として利用できることを示唆します。
BTEB1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Klf9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Klf9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Klf9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Klf9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。