BSPII Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421011-ACT

O gene **Ibsp** em camundongo codifica a **sialoproteína óssea II (BSPII)**, uma glicoproteína secretada, altamente fosforilada, da família **SIBLING**, enriquecida em tecidos mineralizados, onde regula a organização da matriz extracelular e a nucleação de hidroxiapatita. A BSPII liga-se a integrinas e ao colágeno e atua na interface com programas de adesão e migração celular que influenciam a diferenciação de osteoblastos, a atividade de osteoclastos e a remodelação óssea. A expressão de **Ibsp** é comumente usada como marcador de maturação osteogênica e mineralização da matriz, e sua desregulação está associada a alterações no desenvolvimento esquelético e a processos patológicos relacionados à calcificação, relevantes para pesquisas em musculoesquelética e metástase óssea. Essas funções posicionam **Ibsp** na interseção entre sinalização da matriz extracelular, deposição mineral e vias de mecanotransdução estudadas na biologia óssea.

BSPII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ibsp sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BSPII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ibsp em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ibsp, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BSPII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ibsp nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BSPII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BSPII em células tumorais com expressão de Ibsp silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.