BRDG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409252-ACT

STAP1 codifica a BRDG1, uma proteína adaptadora enriquecida em linhagens hematopoéticas que acopla sinais proximais ao receptor a vias efetoras a jusante por meio de domínios modulares de interação. A BRDG1 participa da sinalização associada ao receptor de células B (BCR) e a citocinas, coordenando interações proteína–proteína que influenciam cascatas de fosforilação e programas transcricionais ligados à ativação e à diferenciação de linfócitos. Alterações na expressão de STAP1 ou variações de sequência têm sido investigadas no contexto de sinalização imune desregulada e de fenótipos associados ao metabolismo lipídico, incluindo estudos em coortes de hipercolesterolemia familiar. Como resultado, STAP1/BRDG1 é frequentemente utilizado como um recurso molecular para investigar a arquitetura de redes de sinalização, transições de estado de células imunes e o crosstalk entre vias em modelos celulares humanos.

BRDG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BRDG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BRDG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BRDG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BRDG1 em células tumorais com expressão de STAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.