BRCA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400093-ACT

BRCA1 codifica una proteina oncosoppressore che funge da coordinatore centrale del mantenimento del genoma, attraverso il rilevamento del danno al DNA, la riparazione per ricombinazione omologa e la protezione delle forcelle di replicazione. BRCA1 partecipa al controllo dei checkpoint e a complessi di riparazione associati alla cromatina, integrando la segnalazione lungo le vie ATM/ATR per preservare la stabilità genomica in seguito a rotture a doppio filamento. Contribuisce inoltre alla regolazione trascrizionale e a processi mediati dall’ubiquitina che influenzano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Un’attività di BRCA1 deregolata è fortemente associata a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a un aumento dell’instabilità genomica, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici nella biologia del cancro e nella ricerca sulla riparazione del DNA.

BRCA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRCA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRCA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRCA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRCA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRCA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRCA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRCA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRCA1 nelle cellule tumorali con espressione di BRCA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.