bradykinin B2 R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401771-ACT

BDKRB2 は、ヒトのブラジキニンB2受容体（bradykinin B2 R）をコードする遺伝子であり、キニンに結合して血管トーヌス、内皮透過性、侵害受容（痛覚）、および炎症性シグナル伝達を調節するGタンパク質共役受容体（GPCR）です。受容体の活性化は主としてGq/11およびGiに連結した経路を介し、ホスホリパーゼCの活性化、細胞内Ca2+動員、一酸化窒素（NO）産生、さらに下流のMAPK/ERKおよびPI3Kシグナルを誘導して、組織損傷に対する迅速な細胞応答を形作ります。BDKRB2を介するシグナルはカリクレイン–キニン系の活性と交差し、プロスタグランジン系やレニン–アンジオテンシン系ともクロストークすることで、血管および炎症の恒常性に影響します。B2受容体活性の異常は、心血管系および炎症性の表現型、疼痛シグナル、ならびに浮腫に関連する過程と関連づけられており、内皮細胞、平滑筋、免疫関連モデルにおける機構研究を支持します。

bradykinin B2 R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BDKRB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

bradykinin B2 R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BDKRB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBDKRB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性bradykinin B2 Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBDKRB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbradykinin B2 R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBDKRB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbradykinin B2 R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。