BR-cadherin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401987-NIC

CDH12はBR-カドヘリンをコードしている。BR-カドヘリンは古典的カドヘリンファミリーに属するカルシウム依存性の細胞間接着分子で、同種結合（ホモフィリック相互作用）およびカテニンとの結合を介して組織構築を支える。接着結合（アドヘレンスジャンクション）をアクチン細胞骨格につなぐことで、BR-カドヘリンは接触依存的シグナル伝達、細胞極性、発生や組織リモデリングにおける協調的な細胞移動に影響を与える。CDH12の発現は神経系および上皮の組織化と関連づけられており、カドヘリン媒介性接着の破綻は、疾患生物学における浸潤性挙動や分化プログラムの変化と広く関係する。接合部の制御因子として、BR-カドヘリンは、接着状態の変化が細胞内シグナル伝達や形態形成過程をどのように組み替えるかを研究するための取り組みやすい入口となる。

BR-cadherin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDH12 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDH12内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDH12の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDH12が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。