Partículas Lentivirales de Activación (m2) BMP-3: sc-430986-LAC-2

El gen Bmp3 del ratón codifica BMP-3, un miembro secretado de la superfamilia TGF-β que funciona como regulador extracelular de la señalización osteogénica y de la homeostasis del tejido esquelético. BMP-3 modula la formación ósea al influir en la actividad de la vía BMP/TGF-β, incluido el crosstalk con programas transcripcionales dependientes de SMAD que controlan la diferenciación de los osteoblastos y la deposición de matriz. Estudios genéticos y de expresión vinculan la alteración de la señalización de BMP-3 con variaciones en la densidad mineral ósea y con fenotipos del desarrollo esquelético, lo que respalda su relevancia para modelos de osificación deficiente y remodelación ósea. La edición genética de Bmp3 en sistemas murinos permite la investigación mecanística de redes de señalización esquelética, efectos específicos por linaje en progenitores mesenquimales y respuestas transcripcionales y de la matriz extracelular aguas abajo en contextos del desarrollo y relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral BMP-3 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Bmp3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BMP-3 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Bmp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BMP-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Bmp3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.