Plásmido CRISPR de Activación (h) BMP-1: sc-402432-ACT

BMP1 codifica la proteína morfogenética ósea 1 (BMP-1), una metaloproteasa secretada de la familia de las astacinas que impulsa la maduración de la matriz extracelular (MEC) mediante el procesamiento proteolítico de los procolágenos y la activación de factores asociados a la matriz. A través de eventos de corte que favorecen la fibrilogénesis del colágeno y la organización de la membrana basal, BMP-1 contribuye a la arquitectura del tejido conectivo, a la remodelación tisular y al recambio de la MEC asociado a la reparación de heridas. La actividad de BMP-1 se interseca funcionalmente con la señalización de TGF-β y las vías matricelulares al modular la disponibilidad y el estado de activación de factores de crecimiento y componentes estructurales unidos a la MEC. La desregulación de la expresión de BMP1 o de la actividad de su proteasa se ha implicado en la remodelación fibrótica y en fenotipos hereditarios del tejido conectivo caracterizados por un procesamiento alterado del colágeno.

BMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BMP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BMP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BMP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMP-1 en células tumorales con expresión de BMP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.