BLM hydrolase Double Nickaseプラスミド (h): sc-404411-NIC

BLMH はブレオマイシン加水分解酵素（bleomycin hydrolase）をコードしており、細胞質に局在するシステイン型アミノペプチダーゼとして、ペプチドの N 末端プロセシングを触媒し、細胞内のタンパク質およびペプチドの分解・代謝回転に寄与します。BLMH は一般的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）とアミノ酸代謝に関与し、アミロイドβを含む生理活性ペプチドの処理とも関連づけられていることから、神経変性や細胞ストレス応答に関係する経路との接点が示唆されています。BLMH の発現量や活性の変化は、酸化ストレス、炎症性シグナル伝達、ならびにブレオマイシン曝露に対する感受性の差異といった文脈で検討されており、解毒機構やペプチド異化のメカニズム研究における有用な標的となります。幅広い組織で発現する酵素として、BLMH は細胞質ペプチダーゼ機能がタンパク質品質管理ネットワークとどのように連携するかを解明するためのモデルにもなっています。

BLM hydrolase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BLMH 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BLMH内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BLMHの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BLMHが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。