Bim_EL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400515-ACT

BCL2L11は、BCL-2ファミリーに属するBH3-only型のアポトーシス促進因子Bimをコードしており、細胞ストレスのシグナルをミトコンドリア外膜透過性亢進（MOMP）およびカスパーゼ活性化へと結び付けます。Bim_ELアイソフォームは、リン酸化によって調節される主要な形態であり、MAPK/ERK、JNK、PI3K/AKT経路からのシグナルを統合して、アポトーシス、アノイキス、免疫細胞の恒常性を調整します。抗アポトーシス性BCL-2タンパク質を拮抗し、BAX/BAKを活性化することで、Bimは増殖因子の欠乏、ERストレス、細胞骨格の攪乱といった状況下での細胞運命の決定に寄与します。BCL2L11の発現異常やシグナル制御の破綻は、がん細胞の生存、治療抵抗性の機序、免疫関連の病態生理に関与するとされ、アポトーシスおよびストレス応答研究における重要な結節点となっています。

BimEL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCL2L11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BimEL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCL2L11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCL2L11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BimELの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCL2L11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBimEL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCL2L11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBimEL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。