Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Bim Double Nickaseプラスミド (m2): sc-419332-NIC-2
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Bim Double Nickaseプラスミド (m2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Bimダブルニカースプラスミド（m2）およびBimダブルニカースプラスミド（m22）は、Bcl2l11を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Bim 抗体 (H-5): sc-374358
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Bim Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-419332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスBcl2l11はBH3オンリー型のBcl-2ファミリータンパク質であるBimをコードしており、Bimは抗アポトーシス性Bcl-2タンパク質を拮抗しつつBax/Bakを活性化することでミトコンドリア外膜透過化を促進する強力なプロアポトーシス制御因子である。Bimはサイトカイン欠乏、酸化ストレスおよび小胞体（ER）ストレス、さらにPI3K–AKTやMAPK/ERKを含む増殖因子シグナル経路からの入力を統合し、その結果として内因性アポトーシス、免疫細胞の恒常性、ならびに自己反応性リンパ球の除去を介した免疫寛容の形成に影響を与える。前臨床モデルでは、Bcl2l11/Bim活性の破綻がリンパ球生存の変化、自己免疫、腫瘍細胞の持続に関連することが示されており、ストレス応答および細胞運命決定ネットワークにおける重要な結節点と考えられる。マウスBcl2l11の遺伝子編集は、アポトーシスシグナルの機序解析、造血・免疫表現型の検討、そしてがんや炎症性疾患の研究モデルにおける文脈依存的な脆弱性（依存性）の同定を可能にする。
Bim ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Bcl2l11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Bcl2l11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Bcl2l11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Bcl2l11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。