BID CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400510-ACT

ヒトBIDは、外因性のデスレセプターシグナル伝達を内因性のミトコンドリア依存的アポトーシス経路へと結び付ける、BH3-only型のBCL-2ファミリータンパク質をコードする。カスパーゼ8によって切断され、トランケート型BID（tBID）となった後、BAX/BAK依存的なミトコンドリア外膜透過化を促進し、シトクロムcの放出および下流のカスパーゼ活性化を引き起こすことで、アポトーシス入力を細胞ストレス応答と統合する。BIDの活性は、p53シグナル伝達、NF-κBにより制御される生存経路、ならびに細胞運命決定を形作るミトコンドリアダイナミクスとも交差する。BIDの発現やプロセシングの破綻は、がん生物学、免疫恒常性、組織傷害モデルにおいて観察されるアポトーシス閾値の変化と関連付けられており、細胞死制御の機構研究に有用な結節点となる。

BID CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BIDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BID CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BID 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBID転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BIDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBID遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBID依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBID発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBID経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。