beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β₁-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400660-ACT

ADRB1 codifica o receptor β1-adrenérgico humano (β1-AR), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente à Gs para estimular a adenilil ciclase, aumentar os níveis de AMPc e ativar a sinalização dependente de PKA. Essa via regula o cronotropismo e o inotropismo cardíacos, modula o manejo de cálcio e influencia respostas transcricionais por meio de efetores a jusante, como o CREB. A sinalização do β1-AR se cruza com mecanismos de dessensibilização e tráfego de GPCRs, incluindo fosforilação mediada por GRK/β-arrestina, internalização e ressensibilização do receptor. A expressão ou sinalização desregulada de ADRB1 está implicada na fisiopatologia cardiovascular e oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar redes de sinalização responsivas ao estresse e a farmacologia de receptores em células humanas.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR em células tumorais com expressão de ADRB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.