BDNF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400029-ACT

Il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) è una neurotrofina secreta che si lega a TrkB (NTRK2) e a p75NTR per regolare la sopravvivenza neuronale, la differenziazione, la plasticità sinaptica e il rimodellamento dei circuiti dipendente dall’attività. La segnalazione del BDNF attiva le vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ per coordinare programmi di espressione genica alla base dell’apprendimento, della memoria e dell’equilibrio eccitatorio/inibitorio. Alterazioni dell’espressione o della maturazione (processing) del BDNF sono state collegate alla biologia di malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative, inclusa la suscettibilità ai disturbi dell’umore, il deficit cognitivo e la responsività allo stress. Oltre al sistema nervoso, il BDNF contribuisce al dialogo neuro‑immunitario e metabolico, risultando quindi rilevante per studi sulla disfunzione neuronale associata all’infiammazione.

BDNF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BDNF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BDNF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BDNF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BDNF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BDNF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BDNF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BDNF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BDNF nelle cellule tumorali con espressione di BDNF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.