Bcr CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431007

概要

マウスBcr（breakpoint cluster region）遺伝子は、セリン／スレオニンキナーゼ活性をもつ多ドメイン型のシグナル伝達タンパク質をコードしており、C末端にはRhoファミリーGTPアーゼ活性化タンパク質（RhoGAP）ドメインを有します。これにより、細胞骨格ダイナミクス、接着、細胞移動の制御を担います。BCRはリン酸化依存的なシグナル伝達に関与し、増殖やストレス応答に影響する低分子GTPアーゼ経路を調節し得ます。造血系の文脈では、BCRはABL1との融合パートナーとして、BCR–ABLによる白血病化シグナル伝達を駆動する因子として最もよく知られており、がん性経路の再配線を解明するうえで、その生理的機能の理解が重要です。マウスモデルでは、Bcrの改変により、キナーゼ／GTPアーゼ間のクロストーク、アクチン再構築、状況依存的な増殖制御の機序研究が可能になります。

Bcr CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるBcr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Bcr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Bcrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Bcrタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Bcrシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Bcr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Bcrの機能に不可欠なBcrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Bcrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Bcr CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびBcr CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Bcr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Bcr HDRプラスミド（m）および Bcr HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBcrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBcr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。