Bcl-w CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402639

概要

BCL2L2は、BCL-2ファミリーに属する抗アポトーシス因子Bcl-wをコードしており、BAXやBAKなどの細胞死促進エフェクターの作用を抑えることでミトコンドリア外膜の完全性を維持します。ミトコンドリア経路アポトーシスの制御を通じて、Bcl-wは成長因子の欠乏、DNA損傷、酸化ストレスに対する内因性の細胞死決定に影響を与え、細胞の生存、ストレス適応、組織恒常性を形作ります。BCL2L2の活性は、ミトコンドリア動態や生存シグナルを調節する経路とも交差しており、PI3K/AKT経路やMAPK関連の入力など、BCL-2ファミリーのバランスに収束するシグナルと連動します。Bcl-wの発現異常は、アポトーシスの閾値や生存表現型の変化と関連し、複数の腫瘍における発がんや治療反応性に関わる可能性が示されています。

Bcl-w CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBCL2L2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BCL2L2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BCL2L2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Bcl-wタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Bcl-wシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BCL2L2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Bcl-wの機能に不可欠なBCL2L2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BCL2L2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Bcl-w CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBcl-w CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BCL2L2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Bcl-w HDRプラスミド（h）および Bcl-w HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBCL2L2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBCL2L2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。