Bcl-11a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403612-ACT

BCL11A codifica o fator de transcrição Bcl-11a, uma proteína de ligação ao DNA do tipo dedo de zinco que regula a especificação de linhagem e programas de diferenciação, particularmente nos compartimentos hematopoético e imune. Atua no controle transcricional associado à cromatina, integrando-se a complexos correpressores/correguladores para moldar redes de expressão gênica envolvidas em decisões de destino celular, proliferação e temporização do desenvolvimento. O BCL11A está intimamente ligado à regulação das globinas eritroides e ao controle epigenético mais amplo da maturação hematopoética, tornando-se um nó-chave em vias que governam a troca de hemoglobina e o desenvolvimento linfoide. A atividade desregulada de BCL11A tem sido associada à biologia de doenças hematológicas e a estados de diferenciação alterados, sustentando seu uso como alvo mecanístico em estudos de genômica funcional.

Bcl-11a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL11A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl-11a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL11A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL11A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl-11a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL11A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl-11a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl-11a em células tumorais com expressão de BCL11A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.