BCAR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404301-ACT

BCAR3 (resistência 3 ao antiestrogênio no câncer de mama) codifica uma proteína adaptadora que acopla a sinalização de receptores e de integrinas à remodelação do citoesqueleto e à motilidade. BCAR3 interage com CAS/BCAR1 e com componentes relacionados das adesões focais para modular a atividade de quinases da família Src, a sinalização de pequenas GTPases e vias a jusante que influenciam a adesão, a migração e a proliferação celulares. Por meio dessas conexões em rede, BCAR3 contribui para a regulação da dinâmica epitélio–mesênquima e para a sinalização de crescimento dependente do contexto. Alterações na expressão ou na sinalização de BCAR3 têm sido associadas à invasão de células tumorais e a fenótipos de resposta endócrina, tornando-o um nó útil para estudar programas oncogênicos impulsionados por adesão.

BCAR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCAR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BCAR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCAR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCAR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BCAR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCAR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BCAR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BCAR3 em células tumorais com expressão de BCAR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.