Bax Double Nickaseプラスミド (h): sc-400042-NIC

BAXは、ミトコンドリア外膜透過化（MOMP）を制御して細胞を内因性アポトーシスへと不可逆的に導く、アポトーシス促進性のBCL-2ファミリー・エフェクターであるBaxをコードします。細胞ストレスやDNA損傷シグナルに応答して、Baxは構造変化を伴う活性化を受け、ミトコンドリアへ移行し、オリゴマー化することでシトクロムcの放出と下流のカスパーゼ活性化を促進します。Baxの活性はp53により制御されるチェックポイントや生存シグナル伝達ネットワークと統合され、発生および組織恒常性の維持における細胞運命決定を形作ります。BAXシグナルの異常は、がん生物学、神経変性、ならびに遺伝毒性ストレスへの応答に広く関与しており、アポトーシスおよびミトコンドリア経路の制御を研究するための代表的な標的として用いられています。

Bax ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BAX 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BAX内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BAXの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BAXが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。