bassoon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406918
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- bassoon O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico bassoon, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:bassoon Anticorpo (SAP7F407): sc-58509
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
bassoon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406918 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
BSN codifica a bassoon, uma grande proteína de andaime da citomatriz pré-sináptica que organiza a zona ativa e sustenta a liberação eficiente de neurotransmissores. A bassoon contribui para o ancoramento (docking) e a preparação (priming) de vesículas sinápticas, acoplando os pools de vesículas sinápticas ao influxo de Ca²⁺ mediado por canais de cálcio dependentes de voltagem e coordenando interações com outros componentes da zona ativa durante a sinaptogênese e a manutenção sináptica. Por seu papel na montagem pré-sináptica e na dinâmica do ciclo vesicular, o BSN é estudado em vias que governam a conectividade neuronal, a plasticidade sináptica e a neurotransmissão dependente da atividade. Alterações na organização sináptica associada à bassoon têm sido investigadas no contexto de mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricas, nas quais a disfunção pré-sináptica é um fenótipo celular comum.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO bassoon (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BSN em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BSN, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BSN na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína bassoon.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BSN para a investigação da sinalização de bassoon, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BSN críticos para a função bassoon
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BSN para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo bassoon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo bassoon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BSN. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo bassoon Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR bassoon (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BSN para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BSN definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.