Barx2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403458-ACT

ヒトBARX2は、発生および組織リモデリングの過程において、細胞運命の決定や分化プログラムを制御するホメオボックス型転写因子Barx2をコードします。Barx2は配列特異的なDNA結合を介して、上皮―間葉相互作用、細胞骨格の構築、細胞外マトリックス（ECM）制御に関連する転写ネットワークの調整に寄与し、細胞移動や系譜（リネージ）指定などのプロセスに影響を与えます。BARX2の活性は、形態形成や細胞可塑性を形作るより広範な発生シグナル伝達軸とも連関しており、分化、再生、ならびに転写制御の破綻に関する研究において重要な対象となります。BARX2の発現変動は、異常な組織構築や増殖性疾患の生物学に関わるさまざまな状況で報告されており、転写経路を機構的に解析するうえでの結節点としての有用性を支持しています。

Barx2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BARX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Barx2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BARX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBARX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Barx2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBARX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBarx2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBARX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBarx2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。