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BARD1CRISPR激活质粒(h) | sc-401212-ACT | 20 µg | $397.00 |
BARD1(BRCA1 相关 RING 结构域蛋白 1)编码一种核内蛋白,可与 BRCA1 形成异源二聚体,构成在基因组维护中至关重要的 E3 泛素连接酶复合物。该复合物协调 DNA 双链断裂的信号传导与修复,维持复制叉稳定,并通过对染色质相关底物的泛素依赖性调控参与细胞周期检查点控制。BARD1 还参与转录调控和与凋亡相关的过程,将 DNA 损伤应答与更广泛的细胞应激通路连接起来。BARD1 表达或功能的改变与同源重组缺陷、染色体不稳定以及肿瘤易感性表型有关,因此是研究抑癌网络机制的重要靶点。
BARD1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BARD1的表达。
BARD1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BARD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BARD1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性BARD1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BARD1位点,并能够研究内源性位点上依赖于BARD1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BARD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BARD1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。