BAF155 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400838-ACT

SMARCC1 codifica la subunità umana BAF155 del complesso di rimodellamento della cromatina dipendente da ATP SWI/SNF (BAF), che regola il posizionamento dei nucleosomi per controllare i programmi trascrizionali durante lo sviluppo e la specificazione del destino cellulare. BAF155 sostiene l’accessibilità di enhancer e promotori, coordinando l’espressione genica dipendente dall’RNA polimerasi II in vie legate alla differenziazione, alle risposte al danno al DNA e al controllo del ciclo cellulare. Attraverso interazioni con componenti core del complesso BAF e con fattori di trascrizione che definiscono la linea cellulare, SMARCC1 contribuisce alla regolazione epigenetica della proliferazione e dell’architettura della cromatina. La deregolazione delle subunità SWI/SNF, inclusa SMARCC1, è implicata in stati trascrizionali oncogeni e in altri disturbi caratterizzati da un rimodellamento della cromatina alterato.

BAF155 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SMARCC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BAF155 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SMARCC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SMARCC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BAF155. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SMARCC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BAF155 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BAF155 nelle cellule tumorali con espressione di SMARCC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.