B7-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418032-LAC

CD86 (B7-2) è un membro della superfamiglia delle immunoglobuline, costimolatorio e di superficie cellulare, espresso principalmente sulle cellule presentanti l’antigene, dove si lega a CD28 e CTLA-4 per modulare l’attivazione dei linfociti T, la tolleranza e l’equilibrio dei checkpoint immunitari. Collegando il riconoscimento dell’antigene alla segnalazione costimolatoria, B7-2 influenza l’attività a valle delle vie NF-κB, MAPK e PI3K/AKT e modella la produzione di citochine e la differenziazione dei linfociti T. Un’espressione alterata di CD86 è stata associata a una disregolazione dell’attivazione immunitaria e dei programmi di presentazione dell’antigene osservati in diversi contesti, tra cui l’infiammazione autoimmune, l’elusione immunitaria tumorale e le infezioni croniche. Queste proprietà rendono CD86 uno strumento utile per analizzare il crosstalk tra APC e linfociti T, la biologia dei checkpoint e il controllo trascrizionale dei componenti della sinapsi immunologica.

Le particelle di attivazione lentivirale B7-2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD86 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale B7-2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD86, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di B7-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD86 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.