B-ATF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401553-ACT

BATF (B-ATF) é um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico que forma heterodímeros com proteínas da família JUN para se ligar a elementos regulatórios semelhantes a AP-1 e moldar programas de expressão gênica específicos de linhagem. Em células imunes humanas, BATF é um regulador-chave da diferenciação de células T e da função efetora, incluindo vias que controlam a produção de citocinas, a biologia das células T foliculares auxiliares e a ativação imune adaptativa. Ao cooperar com membros da família IRF em motivos compostos de DNA, BATF influencia a acessibilidade da cromatina e redes transcricionais que coordenam a sinalização imune e respostas ao estresse celular. A atividade desregulada de BATF tem sido associada a fenótipos imunes alterados e implicada em mecanismos de doenças inflamatórias e em estados transcricionais oncogênicos em contextos linfoides, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do controle transcricional.

B-ATF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BATF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B-ATF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BATF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BATF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B-ATF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BATF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B-ATF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B-ATF em células tumorais com expressão de BATF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.