ATP6F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406611

Visão geral

ATP6V0B codifica a ATP6F, uma subunidade acessória da H+-ATPase vacuolar (V-ATPase) que auxilia a translocação de prótons impulsionada por ATP para acidificar endossomos, lisossomos e vesículas secretoras. A atividade da V-ATPase é central para o tráfego endocítico, a reciclagem de receptores, a função do eixo autofagia–lisossomo e o processamento de macromoléculas dependente de pH, influenciando assim a detecção de nutrientes e as respostas celulares ao estresse. A perturbação de subunidades da V-ATPase pode desorganizar a homeostase de organelas e tem sido associada a alterações na dinâmica vesicular e a fenótipos relevantes para doenças em contextos como neurodegeneração, biologia de infecções e metabolismo de células cancerosas, nos quais a acidificação compartimental é frequentemente remodelada.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ATP6F (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ATP6V0B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ATP6V0B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ATP6V0B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ATP6F.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ATP6V0B para a investigação da sinalização de ATP6F, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ATP6V0B críticos para a função ATP6F
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ATP6V0B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ATP6F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ATP6F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ATP6V0B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ATP6F Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ATP6F (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ATP6V0B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ATP6V0B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.