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ATP5J慢病毒激活颗粒(m) | sc-419251-LAC | 200 µl | $455.00 |
Atp5j 编码 ATP5J,它是线粒体 F1F0 ATP 合酶(复合体 V)的一个小型辅助亚基,可支持该全酶复合体的组装与稳定性,而复合体 V 的完整性对高效氧化磷酸化至关重要。通过参与 ATP 生成并维持线粒体质子驱动力,ATP5J 会影响细胞生物能量代谢、线粒体膜电位以及氧化还原稳态。复合体 V 各组分的扰动可能导致代谢通量改变、活性氧(ROS)升高,并触发线粒体自噬、整合性应激信号等代偿性应激反应。作为能量代谢网络中的关键节点,ATP5J 与线粒体功能障碍的实验模型密切相关,而这类功能障碍常与神经退行性变、心代谢表型以及肿瘤生物能量重编程相交织。
ATP5J 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Atp5j 表达。
ATP5J 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Atp5j转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ATP5J表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Atp5j 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。